由于SEC柱的专用孔径和柱体积有限，仅使用一个SEC柱会带来一定的限制。通过耦合两个列，可以克服这个障碍。

两倍的列长度意味着两倍的列体积，从而提高峰值的分辨率。此外，如果使用两种不同孔径的色谱柱，可显著增加适用分子量范围。在本应用笔记中，使用两个具有不同孔径的耦合YMC-Pack二醇柱分析等离子体成分。通过使用这种装置，适用的分子量范围可扩大到700 kDa。

简介

尺寸排除色谱法(SEC)根据水动力半径分离分析物。然而，由于水动力半径在很多情况下与分析物的分子量(MW)有关(假设分析物具有球形)，分析物的MW可以被认为是分离参数。因此，固定相的孔径在SEC中起着关键作用。

它确定了被分析物的分子量被SEC分离的范围。如果孔隙尺寸太小，分析物将被排除在孔隙中，洗脱而不保留。相反，如果孔径过大，分析物会扩散到整个孔隙，洗脱物的洗脱体积与其他低分子量分析物相同。图1为三种不同孔径柱的标定曲线。这清楚地表明了相关性:通过增加固定相的孔径，高分子量分析物的分辨率提高，而小分子量分析物的分辨率随着孔径的减小而增加。

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